iTRAQ

В основі iTRAQ лежить застосування ізотоп-кодуючих ковалентних зв'язків. Даний метод застосовується в протеоміці для вивчення та визначення кількісних змін протеому.[1][2]

Принцип iTRAQ базується на встановленні мітки, що має ковалентний зв'язок з N-кінцем та боковим ланцюгом амінів пептидів, що сформовані при попередній інкубації перетравлених (часто за допомогою пепсину) екстрактів протеїнів з мітками, що в свою чергу мають різну масу. Існують два типи реагентів iTRAQ: 4-комплексні та 8-комплексні, що можуть бути використані для мічення всіх пептидів з різних біологічних зразків. Після встановлення міток на ці зразки вони змішуються в один пул, після чого їх необхідно фракціонувати, що дозволить проводити подальший аналіз за допомогою рідинної хроматографії тандемної мас-спектрометрії (MS/MS). Отримані фрагментовані дані мас-спектрометрії аналізуються за допомогою пошуку по базі даних пептидів, завдяки чому стає можливим ідентифікація мічених пептидів ти визначення протеїнів, яким ці пептиди відповідають. Кожна мітка iTRAQ генерує іон-репортер з невеликою молекулярною масою, що може бути використаний для відносного підрахунку пептидів та завдяки цьому, опосередковано, дає змогу визначити протеїни, з яких ці пептиді походять.